20 Ungeschriebene Regeln für Flüssigchromatographie-Geräte

**Autor: Original von Frau Xiaoyue Lü | HAMAG

Flüssigchromatographie-Geräte mögen robust wirken, sind aber in Wirklichkeit recht empfindlich. Viele Störungen werden nicht durch „Verschleiß“ verursacht, sondern durch „unsachgemäßen Gebrauch“ – bestimmte Gewohnheiten, die wir für selbstverständlich halten, verkürzen stillschweigend die Lebensdauer des Instruments. Jede der folgenden 20 „ungeschriebenen Regeln“ steht für eine Lektion, die unsere Vorgänger auf die harte Tour gelernt haben.

1. Die mobile Phase muss filtriert werden – mit einer 0,22 μm oder 0,45 μm Filtermembran; wenn dies nicht geschieht, ist das gleichbedeutend mit einem Verschleiß der Pumpe.

2. Messen Sie den pH-Wert in der wässrigen Phase – justieren Sie ihn, bevor Sie die organische Phase hinzufügen, da die organische Phase die Elektrodenmessung stört.

3. Verwenden Sie Puffersalze im richtigen pH-Bereich – jedes Salz ist nur in einem bestimmten pH-Bereich wirksam; eine falsche Verwendung ist Zeitverschwendung.

4. Ultraschall-Entgasung allein ist nicht ausreichend – verwenden Sie sie in Kombination mit einem Vakuumentgaser, sonst bringen Sie die Blasen um den Verstand.

5. Beginnen Sie die Gradientenelution nicht bei 0 % organischer Phase – das Risiko von Salzausfällung und Blasen ist extrem hoch; seien Sie besonders vorsichtig mit Phosphaten. (Gilt nur für Systeme mit Salz.)

6. Lassen Sie die mobile Phase niemals leerlaufen – ein Trockenlauf der Pumpe führt zu direktem Verschleiß von Kolben und Dichtringen, und Pumpenreparaturen sind teuer.

7. Spülen Sie unmittelbar nach Verwendung einer salzhaltigen mobilen Phase nach – zuerst mit reinem Wasser, dann mit Methanol; Salzkristalle nutzen die Pumpe wie ein Scheuerschwamm ab.

8. Halten Sie eine sanfte Fließgeschwindigkeit ein und führen Sie sanfte Injektionen durch – plötzliche Änderungen erschüttern das Säulenbett und verursachen irreversible Schäden an der Packung.

9. Prüfen Sie vor der Verwendung einer neuen Säule, ob die Lagerlösung und die mobile Phase mischbar sind – wenn nicht, verwerfen Sie die Säule sofort.

10. Die Säule muss vor und nach der Verwendung von Salz mit einer Übergangsphase gespült werden – spülen Sie mit 10 % Methanol/Wasser über 10 Säulenvolumina; das Überspringen dieses Schritts ruiniert die Säule.

11. Spülen Sie die Säule nicht wahllos in Rückwärtsrichtung – sofern nicht ausdrücklich im Handbuch erlaubt, führt dies zu einem starken Abfall der Säuleneffizienz.

12. Eine Vorsäule muss installiert werden – eine kleine Investition, die sich langfristig auszahlt; ersetzen Sie sie, wenn sie kontaminiert ist.

13. Säulen dürfen nicht austrocknen – bei nicht verwendeten Säulen die Verschlusskappen fest auf beide Enden schrauben; wenn sie austrocknen, verstopfen sie.

14. Proben müssen filtriert werden – alle Proben mit Partikeln filtrieren; für Polysaccharide und Proteine eine hydrophile PTFE-Filtermembran mit 0,22 μm verwenden.

15. Das Probenlösungsmittel muss mit der mobilen Phase kompatibel sein—eine übermäßige Elutionskraft verursacht Lösungsmitteleffekte und führt zu schlechter Peakform.

16. Führen Sie vor der Gradientenelution immer einen Blindlauf durch – andernfalls tarnen sich Verunreinigungsspitzen als Probenpeaks und machen alle Daten unbrauchbar.

17. Bewerten Sie Störungen durch Verunreinigungen auch bei Quantifizierungsmethoden – nehmen Sie nichts als selbstverständlich hin; das wird Sie bei Stabilitätstests einholen.

18. Achten Sie bei der Methodenübertragung auf Unterschiede im Totvolumen der Geräte – dieselbe Methode kann auf verschiedenen Geräten völlig unterschiedliche Ergebnisse liefern.

19. Nutzen Sie Ihre Sinne, um das Gerät täglich zu ‚prüfen‘ – hören Sie auf ungewöhnliche Geräusche, achten Sie auf Blasen und fühlen Sie nach Lecks; frühzeitige Erkennung bedeutet frühzeitige Lösung.

20. Verwenden Sie ausschließlich Reagenzien in chromatographischer Qualität – Verunreinigungen in Reagenzien analytischer Qualität treiben Sie zur Verzweiflung, wenn Sie Phantompeaks nachjagen.