20 Reglas No Escritas para Instrumentos de Cromatografía Líquida

**Autor: Original de la Sra. Xiaoyue Lü | HAMAG

Los instrumentos de cromatografía líquida pueden parecer robustos, pero en realidad son bastante delicados. Muchas fallas no son causadas por "desgaste", sino por "mal uso" — ciertos hábitos operativos que damos por sentado están acortando silenciosamente la vida útil del instrumento. Cada una de las siguientes 20 "reglas no escritas" representa una lección aprendida por las malas por quienes nos precedieron.

1. La fase móvil debe filtrarse: use una membrana de filtro de 0,22 μm o 0,45 μm; no hacerlo equivale a desgastar la bomba.

2. Mida el pH en la fase acuosa: ajústelo antes de añadir la fase orgánica, ya que la fase orgánica interferirá con la lectura del electrodo.

3. Utilice sales tampón dentro del rango de pH correcto: cada sal solo es efectiva dentro de un rango de pH específico; usarla incorrectamente es una pérdida de tiempo.

4. La desgasificación ultrasónica por sí sola no es suficiente: úsela junto con un desgasificador de vacío; de lo contrario, las burbujas harán que cuestione su cordura.

5. No inicie la elución en gradiente al 0% de fase orgánica: el riesgo de precipitación de sales y burbujas es extremadamente alto; tenga especial cuidado con los fosfatos. (Aplica solo a sistemas que contienen sales).

6. Nunca permita que la fase móvil se seque: hacer funcionar la bomba en seco causa desgaste directo en el pistón y los anillos de sellado, y las reparaciones de la bomba son costosas.

7. Enjuague inmediatamente después de usar una fase móvil salina: primero con agua pura y luego con metanol; los cristales de sal desgastarán la bomba como una esponja abrasiva.

8. Mantenga un caudal suave y realice inyecciones suaves: los cambios bruscos golpean el lecho de la columna, causando daños irreversibles al empaque.

9. Antes de usar una columna nueva, verifique si la solución de almacenamiento y la fase móvil son miscibles; si no lo son, deseche la columna inmediatamente.

10. La columna debe enjuagarse con una fase de transición antes y después de usar sal: enjuague con metanol/agua al 10% durante 10 volúmenes de columna; omitir este paso arruinará la columna.

11. No realice el contraflujo de la columna indiscriminadamente, a menos que el manual lo permita explícitamente; esto causará una disminución brusca en la eficiencia de la columna.

12. Se debe instalar una precolumna: una pequeña inversión que ahorra mucho a largo plazo; reemplácela cuando se contamine.

13. No se debe permitir que las columnas se sequen — para columnas que no estén en uso, atornille firmemente las tapas en ambos extremos; si se secan, se obstruirán.

14. Las muestras deben filtrarse: filtre todas las muestras que contengan partículas; use una membrana de filtro PTFE hidrofílica de 0,22 μm para polisacáridos y proteínas.

15. El disolvente de la muestra debe ser compatible con la fase móvil: una capacidad de elución excesiva provocará efectos de disolvente y dará como resultado una mala forma de pico.

16. Siempre ejecute un blanco antes de la elución en gradiente; de lo contrario, los picos de impurezas se harán pasar por picos de muestra, haciendo que todos los datos sean inútiles.

17. Evalúe también la interferencia de impurezas en los métodos de cuantificación: no dé nada por sentado; volverá para atormentarlo durante las pruebas de estabilidad.

18. Al transferir métodos, tenga en cuenta las diferencias en el volumen muerto del instrumento: el mismo método puede producir resultados completamente diferentes en distintos instrumentos.

19. Use sus sentidos para 'revisar' el instrumento a diario: escuche sonidos inusuales, observe burbujas y sienta fugas; la detección temprana significa resolución temprana.

20. Use únicamente reactivos de grado cromatográfico: las impurezas en los reactivos de grado analítico lo llevarán a la desesperación mientras persigue picos fantasma.