**نویسنده: اصلی از اینترنت**
آیا فشار در دستگاه کروماتوگرافی مایع آمادهسازی شما به طور ناگهانی نسبت به قبل به طور قابل توجهی افزایش یافته است؟ علت را پیدا نمیکنید؟ روشهای زیر ممکن است به شما در رفع مشکل کمک کند!
نقاط احتمالی انسداد در کروماتوگرافی مایع: فیلترهای آنلاین، اجزای داخلی شیر تخلیه، نگهدارندههای سوزن انژکتور، ستونها، آونهای ستون و سلولهای جریان. اگر فشار بیش از حد بالا رفت، باید فوراً شیر تخلیه را باز کنید تا فشار کاهش یابد، سپس قبل از بررسی تک تک اجزا، شیر تخلیه را دوباره ببندید.
۱. ستون کروماتوگرافی را جدا کرده و به آرامی سرعت جریان را افزایش دهید تا تغییرات فشار مشاهده شود.
الف. اگر پس از برداشتن ستون کروماتوگرافی فشاری وجود نداشته باشد، این نشان میدهد که انسداد در ستون یا سلول جریانی است:
۱. انتهای جلویی ستون کروماتوگرافی را وصل کرده و انتهای عقبی را جدا کنید.
①. اگر فشار بالا باشد، این نشاندهنده انسداد در انتهای جلویی ستون است. فاز متحرک اخیراً استفاده شده با این ستون را بررسی کنید (رسوب نمک؛ از نسبت بالای فاز آبی استفاده کرده و دمای ستون را برای شستشو با سرعت جریان پایین افزایش دهید) و حلالیت نمونه در حال تجزیه و تحلیل (اگر نمونه حلالیت کمی داشته و رسوب کرده باشد، بدون اتصال آشکارساز، با حلال با حلالیت بالا با سرعت جریان پایین به صورت معکوس شستشو دهید) را بررسی کنید.
②. در نظر بگیرید که به یک فاز متحرک با ویسکوزیته کمتر تغییر دهید (همچنین ممکن است دمای ستون را کمی افزایش دهید یا سرعت جریان را کاهش دهید).
③. دمای ستون خیلی پایین است: در صبحهای سرد زمستان، قبل از اینکه گرمایش آزمایشگاه فعال شود، دمای اتاق بسیار پایین است که باعث افزایش ویسکوزیته فاز متحرک میشود. این میتواند منجر به افزایش قابل توجه فشار ستون و کند شدن اختلاط فاز متحرک شود. بهتر است تا قبل از شروع آزمایش، منتظر بمانید تا دمای اتاق پایدار شود.
۲. اگر فشار ستون پایین است، این نشاندهنده انسداد در سلول جریان بین انتهای پشتی ستون و آشکارساز است.
ستون را بردارید، یک اتصال دوطرفه وصل کنید و لوله را از خروجی آشکارساز جدا کنید (برای جلوگیری از آسیب دیدن آشکارساز در اثر فشار بیش از حد ناشی از انسداد در لوله خروجی). اگر فشار بالا است، سلول جریان مسدود شده است (با جریان کم شستشو دهید)؛ اگر فشار کم است، خط فاضلاب پایینتر از سلول جریان مسدود شده است.
II. اگر پس از برداشتن ستون کروماتوگرافی فشار بالا باقی ماند.
1. لولهکشی بالادست کوره کروماتوگرافی را جدا کنید (برای بررسی انسداد در داخل کوره کروماتوگرافی یا لولهکشی اتصالدهنده).
2. اگر فشار بالا باقی ماند، لولهکشی بالادست انژکتور را جدا کنید (برای بررسی انسداد در لولهکشی نشیمنگاه سوزن انژکتور).
3. اگر فشار بالا باقی ماند، لولهکشی بالادست شیر تخلیه را جدا کنید (برای بررسی انسداد در شیر تخلیه یا لولهکشی آن).
4. اگر فشار در سیستم HPLC بدون اتصال ستون از 3 مگاپاسکال بیشتر شد، احتمالاً هسته شیر تخلیه (عنصر فیلتر) آلوده شده و نیاز به تعویض دارد.
5. اگر فشار بالا باقی ماند، این نشاندهنده انسداد در لولهکشی بالادست یا پاییندست پمپ/میکسر یا در فیلتر خطی است.
هنگامی که انسداد در یک جزء یا قسمتی از لولهکشی شناسایی شد، میتوان آن را تعویض یا شستشو داد:
۱. اگر انسداد ناشی از رسوب نمک باشد، میتوان آن را با آب داغ شستشو داد؛
۲. اگر انسداد ناشی از ذرات معلق باشد، پس از تمیز کردن با اولتراسونیک میتوان آن را شستشو داد؛
۳. اگر انسداد ناشی از رسوب نمونه باشد، پس از تمیز کردن با اولتراسونیک، میتوان آن را با حلال که نمونه در آن محلول است، شستشو داد.