Persian
روش شش مرحلهای برای شناسایی «پیکهای روح» در کروماتوگرافی مایع: دقیقاً چه چیزی یک «پیک روح» را به یک «روح» تبدیل میکند؟
ساخته شده در 08.25
**نویسنده: نسخه اصلی از HAMAG
هر کسی که در کروماتوگرافی مایع کار میکند، به احتمال زیاد با این وضعیت frustrating مواجه شده است: یک پیک مرموز که ناگهان از هیچ روی کروماتوگرام ظاهر میشود. حتی وقتی نمونهای تزریق نمیشود، همچنان وجود دارد؛ حتی بعد از اجرای blank هم باقی میماند. زمان بازداری آن با هیچ جزء شناختهشدهای مطابقت ندارد و شکل آن کاملاً نامنظم است. حتی بعد از تعویض فاز متحرک، شستشوی ستون و باز کردن لولهها، هنوز از بین نمیرود. این همان «پیک روحی» است که لرزه بر اندام کروماتوگرافیها میاندازد—مانند شبحی که در سیستم پرسه میزند.
هنگامی که یک پیک روحی ظاهر میشود، دادهها نامعتبر میشوند، گزارشها به تأخیر میافتند و ممکن است کل دسته نمونهها نیاز به آنالیز مجدد داشته باشند. بسیاری از افراد به آزمون و خطای کور متوسل میشوند و زمان زیادی را هدر میدهند. کلید حل پیکهای روحی در یک رویکرد منطقی و گامبهگام عیبیابی نهفته است.
عملیات ششمرحلهای «شکار پیکهای روح» زیر، دامنه بررسی را لایهبهلایه، از سیستم تا اجزای منفرد، محدود میکند. با دنبال کردن این مراحل به ترتیب، اکثریت قریببهاتفاق پیکهای روح را میتوان با دقت شناسایی کرد.
۱. تزریق空白 | تمایز بین پیکهای روح «داخلی» و «خارجی»
اولویت اصلی: با نصف کردن دامنه بررسی شروع کنید
روش: به جای نمونه از فاز متحرک استفاده کنید و یک چرخه کامل آنالیز را اجرا کنید.
منطق تعیین • اگر پیکهای روح در کروماتوگرام空白 نیز ظاهر شوند: این یک پیک روح داخلی است.
ابتدا، بر بررسی آلودگی ویال تزریق و درپوش مهر و موم تمرکز کنید، زیرا این منبع بسیاری از پیکهای روح است؛ سپس، به ترتیب به فاز متحرک، ستون کروماتوگرافی و لولهها مشکوک شوید.
اگر کروماتوگرام空白 تمیز باشد و هیچ ناهنجاری نشان ندهد: این نشاندهنده پیک روحی خارجی است و مشکل از خود نمونه یا فرآیند تزریق ناشی میشود.
بسیاری از افراد تمایل دارند آلودگی ویالهای تزریق و درپوشهای آببند را نادیده بگیرند؛ شستشوی نامناسب ویالها یا نشت از درپوشهای قدیمی میتواند بهطور مداوم ناخالصیها را وارد کند و منجر به پیکهای روح شود. بلافاصله اجزای مختلف را باز و شستشو ندهید؛ ابتدا یک آنالیز空白 اجرا کنید و بازرسی ویالها و درپوشهای آببند را در اولویت قرار دهید. قبل از اقدام هدفمند، منبع مشکل را شناسایی کنید تا از اتلاف تلاش جلوگیری شود.
۲. تعویض فاز متحرک | بررسی مظنون اصلی
فاز متحرک رایجترین منبع پیکهای روح است و بنابراین مظنون اصلی محسوب میشود.
روش: یک دسته تازه از فاز متحرک تهیه کنید و تزریق دیگری انجام دهید تا تأیید شود. اگر پیکهای روح بلافاصله پس از تعویض ناپدید شوند، پرونده اساساً بسته میشود، زیرا مشکل در فاز متحرک است. سه مورد وجود دارد
علل رایج:
• خلوص ناکافی خود معرف، که منجر به ورود ناخالصیها به سیستم کروماتوگرافی میشود؛
• فاز متحرک برای مدت طولانی نگهداری شده است و باعث اکسیداسیون و تخریب حلال میشود؛
• بطریهای حلال برای مدت طولانی تمیز نشدهاند و آلایندههایی به دیواره بطری چسبیدهاند که به طور مداوم ناخالصی آزاد میکنند. علاوه بر این، pH نامناسب فاز متحرک نیز ممکن است پیکهای روحی غیرعادی ایجاد کند. با شناسایی منبع و رفع آن به طور خاص، این نوع پیک روحی قابل حل است.
۳. شستشوی ستون کروماتوگرافی | پاکسازی کامل «صحنه جرم»
ستون کروماتوگرافی «صحنه جرمی» است که هم فاز متحرک و هم نمونه از آن عبور میکنند و مستعد تجمع آلایندههای نمونه است.
روش: از محلول ۹۰٪ ایزوپروپانول-آب استفاده کنید، آن را با دبی بالا مناسب تنظیم کنید و ستون را حداقل به مدت ۳۰ دقیقه شستشو دهید؛ سپس به فاز متحرک تحلیلی برگردید تا سیستم تعادل یابد. (روش شستشو برای ستونهای فاز معکوس C18) این شرایط شستشو نباید برای سایر انواع ستونها اعمال شود؛ لطفاً برای دستورالعملهای نگهداری به دفترچه راهنمای ستون مربوطه مراجعه کنید.
اگر پس از شستشو، پیکهای روحی بهطور قابل توجهی کاهش یابند، این نشان میدهد که ستون آلوده شده است.
نکته: برای آنالیز روتین نمونههای با ماتریس پیچیده، توصیه میشود شستشوهای نگهداری منظم ستون انجام شود؛ منتظر ظاهر شدن پیکهای روحی نمانید تا اقدام اصلاحی انجام دهید، زیرا پیشگیری همیشه بهتر از درمان است.
۴. بررسی سیستم تزریق نمونه | نظارت دقیق بر «حاملهای» نمونه
سوزن تزریق، نگهدارنده سوزن، حلقه حجمی و شیر ششراهه مسیری را تشکیل میدهند که نمونه از طریق آن وارد دستگاه میشود؛ این بخشها همچنین مستعدترین مناطق برای آلودگی باقیمانده هستند. پس از آنالیز نمونههای با غلظت بالا، اجزا در شکافها باقی میمانند؛ این اجزا در تزریق بعدی شسته شده و به پیکهای روحی تبدیل میشوند.
روش: سوزن تزریق، نگهدارنده سوزن، حلقه حجمی و شیر ششراهه را به طور کامل با متانول یا ایزوپروپانول شستشو دهید، و همزمان محلول شستشوی سوزن را با محلول تازه جایگزین کنید.
توصیه عملی: پس از تحلیل نمونههای با غلظت بالا، تعداد و حجم شستشوی سوزن را افزایش دهید تا مسیر تزریق کاملاً تمیز شود و تداخل اشباح ناشی از باقیماندههای تزریق قبلی از بین برود.
۵. عیبیابی بخشبهبخش لولهها | محدود کردن جستجو
اگر پس از چهار مرحله قبلی، پیک شبح همچنان باقی ماند، زمان استفاده از روش مکانیابی بخشبهبخش لولهها فرا رسیده است.
روش کار: ستون کروماتوگرافی را جدا کنید و با استفاده از یک اتصال دوطرفه، بخش خاصی از لولهها را با تغییر مسیر جریان دور بزنید تا مشخص شود آیا آن بخش آلوده است یا خیر.
توجه: لوله را مستقیماً برش ندهید، زیرا دادههای پایه بهدستآمده از مسیر جریان ناقص قابل اعتماد نیستند. اگر پس از دور زدن یک بخش خاص، پیک روح ناپدید شد، این نشان میدهد که آلاینده در آن بخش از لوله پنهان شده است. با محدود کردن سیستماتیک سیستم کامل HPLC به یک بخش خاص از لوله، حتی سرسختترین آلودگی نیز جایی برای پنهان شدن نخواهد داشت.
۶. بررسی دتکتور | مظنون نهایی
پس از رد شدن تمام اجزای قبلی، باید توجه خود را به جزء نهایی معطوف کنیم — آشکارساز.
دو مرحله در این فرآیند وجود دارد:
• سلول تشخیص را تمیز کنید تا هرگونه آلودگی باقیمانده از داخل سلول حذف شود؛
• زمان کار لامپ دوتریوم و انرژی منبع نور را بررسی کنید. پیری لامپ دوتریوم و کاهش انرژی میتواند مستقیماً باعث نوسانات و رانش خط پایه شود؛ این امر در کروماتوگرام به صورت سیگنالهای تداخلی شبیه به پیکهای روح ظاهر میشود. تأیید پیری لامپ دوتریوم و تعویض بهموقع آن، تداخل پیکهای روح را از بین میبرد.
قانون طلایی عیبیابی: در هر بار فقط یک متغیر را تغییر دهید! یک اصل اصلی دیگر در فرآیند شش مرحلهای عیبیابی وجود دارد که هرگز نباید نادیده گرفته شود: در هر عملیات، فقط یک متغیر را تغییر دهید.
چه در حال تعویض فاز متحرک باشید و چه در حال شستوشوی ستون، هر مرحله باید بهصورت جداگانه اعتبارسنجی شود. تحت هیچ شرایطی نباید همزمان فاز متحرک را تغییر دهید، ستون را شستوشو دهید و سوزن تزریق را تمیز کنید. حتی اگر پیکهای روح ناپدید شوند، هیچ ایدهای نخواهید داشت که کدام مرحله واقعاً مشکل را حل کرده است. اگر عیب دوباره رخ دهد، مجبور خواهید شد کل مجموعه عملیات را کورکورانه تکرار کنید. با کنترل یک متغیر واحد، میتوانید علت ریشهای عیب را با دقت شناسایی کنید و هر جلسه عیبیابی به تجربه عملی شما کمک خواهد کرد.
Contact
Leave your information and we will contact you.
تلفن