۲۰ قانون نانوشته برای دستگاه‌های کروماتوگرافی مایع

**نویسنده: نسخه اصلی از خانم شیائویه لو | HAMAG

دستگاه‌های کروماتوگرافی مایع ممکن است مقاوم به نظر برسند، اما در واقع بسیار ظریف هستند. بسیاری از خرابی‌ها ناشی از «فرسودگی» نیستند، بلکه به دلیل «استفاده نادرست» هستند — برخی عادت‌های عملیاتی که ما بدیهی می‌دانیم، به‌طور خاموش طول عمر دستگاه را کوتاه می‌کنند. هر یک از ۲۰ «قانون نانوشته» زیر، درس‌هایی است که پیشینیان ما به سختی آموخته‌اند.

۱. فاز متحرک باید فیلتر شود — با استفاده از غشای فیلتر ۰.۲۲ میکرومتر یا ۰.۴۵ میکرومتر؛ عدم انجام این کار معادل فرسودگی پمپ است.

۲. pH فاز آبی را اندازه‌گیری کنید—قبل از افزودن فاز آلی آن را تنظیم کنید، زیرا فاز آلی در خواندن الکترود اختلال ایجاد می‌کند.

۳. از نمک‌های بافر در محدوده pH صحیح استفاده کنید—هر نمک فقط در یک محدوده pH خاص مؤثر است؛ استفاده نادرست از آن اتلاف وقت است.

۴. گاززدایی اولتراسونیک به تنهایی کافی نیست—آن را همراه با گاززدای خلأ استفاده کنید، در غیر این صورت حباب‌ها شما را به شک می‌اندازند.

۵. شستشوی گرادیانی را با ۰٪ فاز آلی شروع نکنید—خطر رسوب نمک و حباب بسیار زیاد است؛ به ویژه با فسفات‌ها احتیاط کنید. (فقط برای سیستم‌های حاوی نمک اعمال می‌شود.)

۶. هرگز اجازه ندهید فاز متحرک خشک شود—خشک شدن پمپ در حین کار باعث سایش مستقیم پیستون و حلقه‌های آب‌بند می‌شود و تعمیر پمپ گران است.

۷. بلافاصله پس از استفاده از فاز متحرک حاوی نمک، شستشو دهید—ابتدا با آب خالص، سپس با متانول؛ کریستال‌های نمک مانند سیم ظرفشویی به پمپ آسیب می‌زنند.

۸. دبی ملایم را حفظ کنید و تزریق‌های ملایم انجام دهید—تغییرات ناگهانی بستر ستون را شوک می‌دهد و آسیب غیرقابل برگشتی به فاز ساکن وارد می‌کند.

۹. قبل از استفاده از ستون جدید، بررسی کنید که آیا محلول نگهداری و فاز متحرک با یکدیگر قابل اختلاط هستند—اگر نیستند، بلافاصله ستون را دور بیندازید.

۱۰. ستون باید قبل و بعد از استفاده از نمک با فاز انتقالی شستشو داده شود—با ۱۰٪ متانول/آب به مدت ۱۰ برابر حجم ستون شستشو دهید؛ رد شدن از این مرحله ستون را خراب می‌کند.

۱۱. ستون را بدون دلیل شستشوی معکوس نکنید—مگر اینکه در دفترچه راهنما صریحاً مجاز باشد، این کار باعث افت شدید راندمان ستون می‌شود.

۱۲. ستون محافظ باید نصب شود—سرمایه‌گذاری کوچک که در درازمدت صرفه‌جویی زیادی می‌کند؛ وقتی آلوده شد آن را تعویض کنید.

۱۳. ستون‌ها نباید اجازه داده شوند که خشک شوند — برای ستون‌هایی که استفاده نمی‌شوند، درپوش‌ها را محکم روی هر دو انتها ببندید؛ اگر خشک شوند، مسدود خواهند شد.

۱۴. نمونه‌ها باید فیلتر شوند — تمام نمونه‌های حاوی ذرات را فیلتر کنید؛ برای پلی‌ساکاریدها و پروتئین‌ها از غشای فیلتر PTFE آبدوست با قطر ۰.۲۲ میکرومتر استفاده کنید.

15. حلال نمونه باید با فاز متحرک سازگار باشد—ظرفیت شستشوی بیش از حد باعث اثرات حلال شده و شکل پیک ضعیفی ایجاد می‌کند.

۱۶. همیشه قبل از شیب‌شویی (گرادیان) یک نمونه خالی (بلانک) اجرا کنید—در غیر این صورت، پیک‌های ناخالصی به‌عنوان پیک‌های نمونه ظاهر می‌شوند و تمام داده‌ها بی‌استفاده می‌شوند.

۱۷. تداخل ناخالصی‌ها را در روش‌های اندازه‌گیری کمی نیز ارزیابی کنید—هیچ چیز را بدیهی نگیرید؛ این موضوع در طول آزمایش‌های پایداری دوباره به سراغتان خواهد آمد.

۱۸. هنگام انتقال روش‌ها، به تفاوت‌های حجم فضای مرده دستگاه توجه کنید—همان روش ممکن است نتایج کاملاً متفاوتی روی دستگاه‌های مختلف بدهد.

۱۹. از حواس خود برای «بررسی» روزانه دستگاه استفاده کنید—به صداهای غیرعادی گوش دهید، مراقب حباب‌ها باشید و نشتی‌ها را حس کنید؛ تشخیص زودهنگام یعنی رفع زودهنگام.

۲۰. فقط از معرف‌های درجه کروماتوگرافی استفاده کنید—ناخالصی‌های موجود در معرف‌های درجه تحلیلی شما را در تعقیب پیک‌های خیالی به ناامیدی می‌کشاند.