**نویسنده:Orgianl از اینترنت
ویالهای نمونه کروماتوگرافی از مواد مصرفی ضروری هستند که برای نگهداری نمونهها جهت آنالیز در تکنیکهایی مانند کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) و کروماتوگرافی گازی (GC) استفاده میشوند. تمیزی آنها مستقیماً بر پایداری خط پایه کروماتوگرافی، کیفیت پیک و دقت نتایج آزمون تأثیر میگذارد. اگر آلایندهها یا ناخالصیها در داخل ویالها باقی بمانند، این امر بهراحتی میتواند منجر به مشکلاتی مانند پیکهای شبح و رانش خط پایه شود؛ بنابراین، تمیز کردن و نگهداری صحیح ویالهای نمونه کروماتوگرافی از اهمیت بالایی برخوردار است.
I. آمادهسازیهای قبل از تمیزکاری
مرتبسازی و دستهبندی
ویالهای نمونه را بر اساس جنس (شیشه، پلیپروپیلن) و اندازه (۱.۵ میلیلیتر، ۲ میلیلیتر و غیره) دستهبندی کنید تا از خراشیدگی یا تغییر شکل ناشی از شستشوی مواد مختلف با هم جلوگیری شود.
هر ویال نمونهای که شکسته، ترک خورده یا لبههای تغییرشکلیافته دارد را جدا کنید و بلافاصله دور بیندازید تا از آببندی ضعیف یا آلودگی باقیماندهای که حذف آن دشوار است جلوگیری شود.
بازکردن مواد مصرفی
ویالهای نمونه را کاملاً از درپوشها و سپتومهایشان جدا کنید. توصیه میشود سپتومها بهصورت جداگانه شسته یا مستقیماً تعویض شوند (سپتومهایی که چندین بار استفاده میشوند مستعد پیرشدن و جذب ناخالصی هستند).
اگر بقایای نمونه با غلظت بالا یا مواد کممحلول در داخل ویال وجود دارد، ابتدا مایع زائد را بیرون بریزید و ویال را با آب خالص بهصورت مقدماتی آبکشی کنید.
II. روشهای تمیزکاری برای سطوح مختلف آلودگی
۱. تمیزکاری معمول برای آلودگی خفیف (مناسب برای باقیماندههای نمونه محلول در آب)
مناسب برای نمونههای معمولی مورد استفاده در آزمایشهای روتین (مانند اسیدهای آلی، قندها، محلولهای نمک معدنی). روش کار به شرح زیر است:
ویال نمونه را تا سهچهارم حجم آن با آب خالص پر کنید، به مدت ۵ تا ۱۰ دقیقه در دستگاه اولتراسونیک قرار دهید، تکان دهید، سپس مایع زائد را دور بریزید.
روش فوق را ۲ تا ۳ بار تکرار کنید تا آب تخلیهشده شفاف و عاری از ناخالصی قابل مشاهده باشد.
در نهایت، دیوارههای داخلی را ۲ تا ۳ بار با متانول یا استونیتریل با درجه کروماتوگرافی بشویید تا باقیماندههای آلی جزئی غیر از ناخالصیهای محلول در آب حذف شوند.
ویال نمونه را به صورت وارونه روی کاغذ صافی بدون گرد و غبار قرار دهید و بگذارید در هود آزمایشگاه به طور طبیعی خشک شود.
۲. آلودگی متوسط (مناسب برای نمونههای آلی و باقیماندههای چرب)
مناسب برای باقیماندههای موجود در نمونههای حاوی حلالهای آلی، چربیها، پروتئینها و سایر موادی که در آب کمحل هستند. روش کار به شرح زیر است:
ابتدا ویال نمونه را به مدت ۳۰ دقیقه در اتانول بیآب یا استون خیس کنید تا باقیماندههای آلی نرم شوند.
محلول خیساندن را دور بریزید، مقدار مناسبی محلول شوینده خنثی آبی (مثلاً محلول ۵٪ مایع ظرفشویی) اضافه کنید و به مدت ۱۵ تا ۲۰ دقیقه در دستگاه اولتراسونیک قرار دهید.
دیوارههای داخلی بطری را مکرراً با آب خالص آبکشی کنید تا هیچ کفی باقی نماند و اطمینان حاصل شود که تمام بقایای شوینده کاملاً حذف شدهاند.
دو بار با متانول با درجه کروماتوگرافی بشویید، سپس بطریها را وارونه قرار دهید تا در هوا خشک شوند یا آنها را در آون با دمای پایین ۴۰ تا ۶۰ درجه سانتیگراد قرار دهید تا خشک شوند (تا از شکستن بطریهای شیشهای به دلیل دمای بالا جلوگیری شود).
۳. آلودگی شدید (مناسب برای باقیماندههای نمونه با جذب قوی و تجزیهناپذیر)
مناسب برای باقیماندههای سرسخت مانند باقیماندههای آفتکش، آنتیبیوتیکها و نمکهای بافر با غلظت بالا. روش کار به شرح زیر است:
یک محلول تمیزکننده تخصصی تهیه کنید: بر اساس نوع آلاینده انتخاب کنید؛ برای مثال، آلایندههای قلیایی را در اسید نیتریک رقیق ۵٪ خیس کنید؛ باقیماندههای آلی سرسخت را در مخلوط متانول-اسید کلریدریک ۱۰٪ خیس کنید.
ویالهای نمونه را کاملاً در محلول تمیزکننده غوطهور کنید و به مدت ۲ تا ۴ ساعت خیس کنید (یا به مدت ۱۰ دقیقه تحت تمیزکاری فراصوت قرار دهید). مراقب باشید که از تماس طولانیمدت اسیدها یا بازهای قوی با ویالهای نمونه پلیپروپیلن جلوگیری کنید.
ویالهای نمونه را بردارید و به طور مکرر با آب خالص بشویید تا محلول خنثی شود (با نوارهای تست pH بررسی کنید) تا اطمینان حاصل شود که هیچ باقیماندهای از محلول تمیزکننده باقی نمانده است.
به ترتیب با اتانول و متانول با درجه کروماتوگرافی بشویید، سپس خشک کنید و برای استفاده بعدی کنار بگذارید.
توجه: پس از تمیز کردن با اسیدها یا قلیاهای قوی، شستشوی کامل ضروری است؛ در غیر این صورت، اسیدها یا قلیاهای باقیمانده ممکن است ستون کروماتوگرافی را خورده یا شرایط pH را در طول آنالیز تحت تأثیر قرار دهند.
III. خشک کردن و نگهداری پس از تمیز کردن
انتخاب روش خشک کردن
خشک کردن در هوا: مناسب برای ویالهای نمونه شیشهای؛ آنها را وارونه در محیطی بدون گرد و غبار قرار دهید تا از نشستن گرد و غبار در داخل جلوگیری شود. این روش زمان بیشتری میبرد اما احتمال آسیب به ویالها کمتر است.
خشک کردن در آون: دمای ≤۶۰ درجه سانتیگراد را حفظ کنید. اطمینان حاصل کنید که بیشتر رطوبت داخل بطریها از قبل تخلیه شده است تا از ترک خوردن شیشه به دلیل قرار گرفتن ناگهانی در معرض حرارت بالا جلوگیری شود؛ خشک کردن در آون برای بطریهای نمونه پلیپروپیلن توصیه نمیشود تا از تغییر شکل آنها جلوگیری شود.
خشک کردن با دمش نیتروژن: مناسب برای موقعیتهای اضطراری؛ به سرعت داخل بطریها را با نیتروژن با خلوص بالا پاکسازی کنید. این روش کارآمد است و از آلودگی ثانویه جلوگیری میکند.
نکات نگهداری
پس از تمیز و خشک شدن، ویالهای نمونه باید در یک جعبه نگهداری تمیز و دربدار قرار گیرند تا از آلودگی ناشی از گرد و غبار و ذرات معلق آزمایشگاهی جلوگیری شود.
درب ویالها و سپتومهای جدید باید به طور جداگانه در ظروف دربسته نگهداری شوند و فقط بلافاصله قبل از استفاده مونتاژ شوند تا از جذب ناخالصی توسط سپتومها جلوگیری شود.
ویالهای نمونهای که در دستههای مختلف تمیز شدهاند باید به طور جداگانه نگهداری و به وضوح برچسبگذاری شوند؛ اولویت باید به استفاده از دستهای که ابتدا تمیز شده است داده شود.
IV. اقدامات احتیاطی برای نگهداری روتین
از آلودگی متقاطع جلوگیری کنید
برای انواع مختلف نمونهها از ویالهای نمونه جداگانه استفاده کنید؛ برای مثال، ویالهای نمونهای که برای آزمایش باقیمانده آفتکش استفاده میشوند نباید با ویالهای مورد استفاده برای تجزیه تغذیهای مواد غذایی مخلوط شوند.
تجهیزات تمیزکننده (حمامهای تمیزکننده فراصوت، پنسها، بشرها) باید به طور منظم تمیز شوند تا از آلوده شدن ویالهای نمونه توسط ناخالصیهای حملشده توسط تجهیزات جلوگیری شود.
نگهداری حلقههای آببندی و درپوشها
حلقههای آببندی سیلیکونی فقط برای یک بار مصرف توصیه میشوند؛ پس از سوراخ شدن مکرر، مستعد پارگی و ریزش ذرات هستند که ممکن است نمونه را آلوده کرده یا سوزن تزریق را مسدود کنند.
اگر درپوشهای پیچی خورده شوند یا بهدرستی آببندی نشوند، باید فوراً تعویض شوند تا از تبخیر نمونه یا ورود آلایندههای خارجی جلوگیری شود.
بررسیهای موردی منظم
پس از تمیزکاری، باید تعدادی از ویالهای نمونه بهصورت تصادفی انتخاب شده، با حلال شاهد (مثلاً فاز متحرک) پر شوند و برای بررسی خط پایه آنالیز گردند. در صورت مشاهده هر پیک غیرعادی، ویالها باید مجدداً تمیز شوند.
V. دستورالعملهای تمیزکاری
از برسهای با موی سخت یا پشم فولادی برای ساییدن دیوارههای داخلی ویالهای نمونه کروماتوگرافی استفاده نکنید، زیرا ممکن است باعث ایجاد خراش شود؛ آلایندهها ممکن است در این خراشها باقی بمانند و حذف کامل آنها دشوار باشد.
ویالهای نمونه پلیپروپیلن نباید در معرض دمای بالا (بیش از ۶۰ درجه سانتیگراد) یا عوامل اکسیدکننده قوی قرار گیرند تا از تغییر شکل یا پیرشدن مواد جلوگیری شود.
ویالهای نمونه حاوی مواد بسیار سمی مانند سیانید یا جیوه باید ابتدا مطابق مقررات دفع زبالههای خطرناک تحت تصفیه بیخطرسازی قرار گیرند و سپس تمیز شوند.