20 Règles non écrites pour les instruments de chromatographie liquide

**Auteur : Original de Mme Xiaoyue Lü | HAMAG

Les instruments de chromatographie liquide peuvent sembler robustes, mais ils sont en réalité assez délicats. De nombreux défauts ne sont pas causés par une « usure », mais par une « mauvaise utilisation » — certaines habitudes de fonctionnement que nous tenons pour acquises raccourcissent silencieusement la durée de vie de l’instrument. Chacune des 20 « règles non écrites » suivantes représente une leçon apprise à la dure par ceux qui nous ont précédés.

1. La phase mobile doit être filtrée — en utilisant une membrane filtrante de 0,22 μm ou 0,45 μm ; ne pas le faire équivaut à user la pompe.

2. Mesurer le pH dans la phase aqueuse — l'ajuster avant d'ajouter la phase organique, car la phase organique interférera avec la lecture de l'électrode.

3. Utiliser des sels tampons dans la plage de pH correcte — chaque sel n'est efficace que dans une plage de pH spécifique ; l'utiliser incorrectement est une perte de temps.

4. Le dégazage par ultrasons seul ne suffit pas — l'utiliser en conjonction avec un dégazeur sous vide, sinon les bulles vous feront remettre en question votre santé mentale.

5. Ne pas commencer l'élution en gradient à 0 % de phase organique — le risque de précipitation de sel et de bulles est extrêmement élevé ; faites particulièrement attention aux phosphates. (S'applique uniquement aux systèmes contenant des sels.)

6. Ne jamais laisser la phase mobile s'épuiser — faire fonctionner la pompe à sec provoque une usure directe du piston et des joints toriques, et les réparations de pompe sont coûteuses.

7. Rincer immédiatement après l'utilisation d'une phase mobile saline—d'abord avec de l'eau pure, puis avec du méthanol ; les cristaux de sel useront la pompe comme une éponge abrasive.

8. Maintenir un débit doux et effectuer des injections douces—les changements brusques choquent le lit de la colonne, provoquant des dommages irréversibles au garnissage.

9. Avant d'utiliser une nouvelle colonne, vérifier si la solution de stockage et la phase mobile sont miscibles—si elles ne le sont pas, jeter la colonne immédiatement.

10. La colonne doit être rincée avec une phase de transition avant et après l'utilisation de sel—rincer avec 10 % de méthanol/eau pendant 10 volumes de colonne ; sauter cette étape ruinera la colonne.

11. Ne pas rincer la colonne en sens inverse sans discernement—sauf si cela est explicitement autorisé dans le manuel, cela entraînera une baisse nette de l'efficacité de la colonne.

12. Une colonne de garde doit être installée—un petit investissement qui permet d'économiser beaucoup à long terme ; la remplacer lorsqu'elle est contaminée.

13. Les colonnes ne doivent pas être autorisées à sécher — pour les colonnes non utilisées, vissez fermement les bouchons aux deux extrémités ; si elles sèchent, elles se boucheront.

14. Les échantillons doivent être filtrés — filtrez tous les échantillons contenant des particules ; utilisez une membrane filtrante PTFE hydrophile de 0,22 μm pour les polysaccharides et les protéines.

15. Le solvant de l'échantillon doit être compatible avec la phase mobile—une capacité d'élution excessive provoquera des effets de solvant et entraînera une mauvaise forme de pic.

16. Toujours effectuer un blanc avant l'élution en gradient — sinon, les pics d'impuretés se feront passer pour des pics d'échantillon, rendant toutes les données inutilisables.

17. Évaluer également l'interférence des impuretés dans les méthodes de quantification — ne rien tenir pour acquis ; cela reviendra vous hanter lors des tests de stabilité.

18. Lors du transfert de méthodes, être attentif aux différences de volume mort de l'instrument — la même méthode peut donner des résultats complètement différents sur différents instruments.

19. Utiliser vos sens pour « vérifier » l'instrument quotidiennement — écouter les bruits inhabituels, surveiller les bulles et sentir les fuites ; une détection précoce signifie une résolution précoce.

20. Utiliser uniquement des réactifs de qualité chromatographique — les impuretés dans les réactifs de qualité analytique vous mèneront au désespoir en poursuivant des pics fantômes.