Molteplici fattori che influenzano la durata della colonna cromatografica e le loro soluzioni

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La durata di una colonna cromatografica è una questione di notevole interesse, poiché è direttamente collegata ai costi. Quali fattori influenzano la durata di servizio di una colonna? Esistono metodi per prolungare questa durata?

Le condizioni cromatografiche sono considerate estreme quando:

① Il pH della fase mobile è eccessivamente estremo;

② La concentrazione di sale tampone nella fase mobile è eccessivamente alta;

③ La pressione della colonna è eccessivamente alta;

④ La temperatura della colonna è eccessivamente alta.

1. Le colonne standard a base di silice tollerano tipicamente valori di pH compresi tra 2 e 6. Sotto pH 2, la fase legata può idrolizzarsi e staccarsi; sopra pH 7, l'imballaggio di silice può dissolversi e fuoriuscire.

2. Concentrazione di sale tampone eccessivamente alta nella fase mobile:

① Le impurità meccaniche nei sali tampone possono essere elevate; è necessaria la filtrazione a membrana dei sali tampone.

② A concentrazioni elevate di sale nel buffer, una proporzione eccessiva della fase organica nei gradienti può causare precipitazione salina, bloccando miscelatori, iniettori, colonne e tubazioni.

3. Alta pressione della colonna dovuta all'alta viscosità della fase mobile:

Solventi ad alta viscosità: ad es. isopropanolo, etanolo, diossano, miscele metanolo-acqua

4. I produttori raccomandano generalmente temperature della colonna inferiori a 50°C, poiché il calore eccessivo può accorciare la durata della colonna.

1. Le colonne organo ibride, come menzionato in precedenza, mostrano una tolleranza superiore alle fluttuazioni ambientali di pH e temperatura.

2. Le strutture microporose all'interno delle matrici di silice, simili alle fessure dentali, causano facilmente ritenzione del campione o adsorbimento morto.

3. Le colonne con particelle di dimensioni più piccole sono più soggette a pressioni elevate della colonna

Dobbiamo comprendere l'origine del campione—se si tratta di un estratto di prodotto naturale, campione biologico, prodotto di fermentazione o composto sintetico. Per gli estratti di prodotti naturali, il nostro lavoro preparatorio implica l'arricchimento del composto target in base alle sue proprietà, rimuovendo contaminanti come pigmenti che potrebbero ostruire la colonna. Per i campioni biologici—che possono provenire da tessuti, sangue, ecc.

dobbiamo eliminare i componenti che sporcano la colonna, come fosfolipidi e proteine, arricchendo al contempo i componenti target a bassa abbondanza. Per i prodotti di fermentazione, è necessario rimuovere nutrienti come zuccheri nel brodo di fermentazione e componenti da cellule microbiche rotte, mentre i componenti target a bassa concentrazione vengono arricchiti. Per i prodotti sintetici, dobbiamo identificare i componenti residui, i sottoprodotti e l'eccesso di materie prime nella soluzione di reazione, rimuovendo in modo appropriato i componenti che contaminano la colonna.

Fonti di contaminazione della colonna: ① Provenienti dal campione; ② Provenienti dalla fase mobile.