20 Niepisanych Zasad dla Instrumentów do Chromatografii Cieczowej

**Autor: Oryginał od pani Xiaoyue Lü | HAMAG

Aparaty do chromatografii cieczowej mogą wyglądać na solidne, ale w rzeczywistości są dość delikatne. Wiele awarii nie jest spowodowanych „zużyciem”, ale „niewłaściwym użytkowaniem” — pewne nawyki operacyjne, które uważamy za oczywiste, po cichu skracają żywotność aparatu. Każda z poniższych 20 „niepisanych zasad” to lekcja wyciągnięta z trudnych doświadczeń tych, którzy byli przed nami.

1. Faza ruchoma musi być filtrowana — przy użyciu membrany filtracyjnej o średnicy porów 0,22 μm lub 0,45 μm; zaniechanie tego jest równoznaczne ze zużywaniem pompy.

2. Zmierz pH w fazie wodnej — wyreguluj je przed dodaniem fazy organicznej, ponieważ faza organiczna będzie zakłócać odczyt elektrody.

3. Stosuj sole buforowe w odpowiednim zakresie pH — każda sól działa skutecznie tylko w określonym zakresie pH; użycie jej niewłaściwie to strata czasu.

4. Samo odgazowywanie ultradźwiękowe nie wystarczy — stosuj je w połączeniu z odgazowywaczem próżniowym, w przeciwnym razie pęcherzyki powietrza przyprawią cię o wątpliwości co do własnego zdrowia psychicznego.

5. Nie rozpoczynaj elucji gradientowej od 0% fazy organicznej — ryzyko wytrącenia soli i powstawania pęcherzyków jest bardzo wysokie; szczególną ostrożność zachowaj przy fosforanach. (Dotyczy tylko układów zawierających sole.)

6. Nigdy nie dopuść do wyschnięcia fazy ruchomej — praca pompy na sucho powoduje bezpośrednie zużycie tłoka i pierścieni uszczelniających, a naprawa pompy jest kosztowna.

7. Natychmiast przepłucz kolumnę po użyciu solnej fazy ruchomej – najpierw czystą wodą, a następnie metanolem; kryształki soli będą ścierać pompę jak papier ścierny.

8. Utrzymuj delikatny przepływ i wykonuj delikatne wstrzyknięcia – nagłe zmiany wstrząsają złożem kolumny, powodując nieodwracalne uszkodzenie wypełnienia.

9. Przed użyciem nowej kolumny sprawdź, czy roztwór przechowujący i faza ruchoma są mieszalne – jeśli nie są, natychmiast wyrzuć kolumnę.

10. Kolumna musi być przepłukana fazą przejściową zarówno przed, jak i po użyciu soli – przepłucz 10% metanolem/wodą przez 10 objętości kolumny; pominięcie tego kroku zniszczy kolumnę.

11. Nie przepłukuj kolumny wstecznie bez wyraźnej potrzeby – chyba że jest to wyraźnie dozwolone w instrukcji, spowoduje to gwałtowny spadek wydajności kolumny.

12. Należy zamontować kolumnę ochronną – to niewielka inwestycja, która na dłuższą metę oszczędza wiele; wymień ją, gdy ulegnie zanieczyszczeniu.

13. Kolumny nie mogą wyschnąć — w przypadku nieużywanych kolumn należy szczelnie zakręcić nakrętki na obu końcach; jeśli wyschną, ulegną zatkaniu.

14. Próbki należy filtrować — należy filtrować wszystkie próbki zawierające cząstki; do polisacharydów i białek stosować hydrofilową membranę filtracyjną PTFE o średnicy porów 0,22 μm.

15. Rozpuszczalnik próbki musi być kompatybilny z fazą ruchomą—nadmierna siła elucji spowoduje efekty rozpuszczalnikowe i doprowadzi do złego kształtu pików.

16. Zawsze wykonuj ślepą próbę przed elucją gradientową — w przeciwnym razie piki zanieczyszczeń będą udawać piki próbki, czyniąc wszystkie dane bezużytecznymi.

17. Oceniaj interferencję zanieczyszczeń również w metodach ilościowych — nie bierz niczego za pewnik; wróci to do Ciebie podczas testów stabilności.

18. Podczas przenoszenia metod zwracaj uwagę na różnice w martwej objętości aparatu — ta sama metoda może dawać całkowicie różne wyniki na różnych instrumentach.

19. Używaj zmysłów do codziennego „sprawdzania” aparatu — nasłuchuj nietypowych dźwięków, obserwuj pęcherzyki i wyczuwaj wycieki; wczesne wykrycie oznacza wczesne rozwiązanie.

20. Używaj wyłącznie odczynników klasy chromatograficznej — zanieczyszczenia w odczynnikach klasy analitycznej doprowadzą Cię do rozpaczy podczas ścigania widmowych pików.