Русский
Метод из шести шагов для идентификации «пиков-призраков» в жидкостной хроматографии: что именно делает «пик-призрак» «призраком»?
Создано 08.25
**Автор: оригинал от HAMAG
Любой, кто работает с жидкостной хроматографией, почти наверняка сталкивался с этой досадной ситуацией: на хроматограмме внезапно, из ниоткуда, появляется загадочный пик. Он остаётся даже тогда, когда образец не вводится; он сохраняется и после прогона холостой пробы. Его время удерживания не совпадает ни с одним известным компонентом, а форма полностью нерегулярна. Даже после смены подвижной фазы, промывки колонки и разборки трубопроводов он упорно не исчезает. Это тот самый «пик-призрак», от которого у хроматографистов мурашки по коже — словно привидение, поселившееся в системе.
Как только появляется фантомный пик, данные становятся недействительными, отчеты задерживаются, и всю партию образцов, возможно, придется анализировать заново. Многие прибегают к слепым проб и ошибок, тратя огромное количество времени. Ключ к устранению фантомных пиков заключается в логичном, пошаговом подходе к поиску неисправностей.
Следующая шестиэтапная «операция по поиску призраков» сужает область расследования слой за слоем, от системы до отдельных компонентов. Следуя этим шагам по порядку, подавляющее большинство призрачных пиков можно точно определить.
1. Холостой ввод | Различие между «внутренними» и «внешними» призрачными пиками
Наивысший приоритет: начните с сокращения области расследования вдвое
Процедура: Используйте подвижную фазу вместо образца и выполните полный цикл анализа.
Логика определения • Если призрачные пики также появляются на холостой хроматограмме: это внутренний призрачный пик.
Сначала сосредоточьтесь на проверке загрязнения виалы для ввода пробы и крышки с уплотнением, так как это источник многих призрачных пиков; затем по очереди проверяйте подвижную фазу, хроматографическую колонку и трубки.
Если фоновая хроматограмма чистая и не показывает отклонений: это указывает на внешний пик-призрак, при этом проблема исходит из самого образца или процесса ввода пробы.
Многие люди склонны упускать из виду загрязнение инжекционных виал и уплотнительных крышек; выщелачивание из старых уплотнений или недостаточная очистка виал могут постоянно вносить примеси, что приводит к появлению призрачных пиков. Не разбирайте и не промывайте сразу различные компоненты; сначала проведите холостой анализ, уделяя первоочередное внимание проверке виал и уплотнительных крышек. Определите источник проблемы, прежде чем принимать целенаправленные меры, чтобы избежать напрасных усилий.
2. Замена подвижной фазы | Расследование главного подозреваемого
Подвижная фаза является наиболее распространённым источником фантомных пиков и поэтому является главным подозреваемым.
Процедура: приготовьте свежую порцию подвижной фазы и выполните повторную инъекцию для проверки. Если фантомные пики исчезнут сразу после замены, дело можно считать закрытым, так как проблема заключается в подвижной фазе. Существует три
распространённые причины:
• Недостаточная чистота самого реагента, что приводит к попаданию примесей в хроматографическую систему;
• Подвижная фаза хранилась слишком долго, что вызвало окисление и ухудшение свойств растворителя;
• Бутылки для растворителя давно не очищались, на стенках бутылок накопились загрязнения, которые постоянно выделяют примеси. Кроме того, неправильный pH подвижной фазы также может вызывать появление аномальных фантомных пиков. Определив источник и устранив его, можно решить проблему таких фантомных пиков.
3. Промывка хроматографической колонки | Тщательная уборка «места преступления»
Хроматографическая колонка — это «место преступления», через которое проходят и подвижная фаза, и образец, и она склонна накапливать загрязнения из образца.
Процедура: Используйте 90% раствор изопропанола и воды, установите подходящую высокую скорость потока и промывайте колонку не менее 30 минут; затем вернитесь к аналитической подвижной фазе для уравновешивания системы. (Метод промывки для колонок с обращенной фазой C18) Эти условия промывки не должны применяться к другим типам колонок; для инструкций по обслуживанию обратитесь к соответствующему руководству по колонке.
Если после промывки пики-призраки значительно уменьшились, это указывает на то, что колонка была загрязнена.
Совет: Для рутинного анализа образцов со сложной матрицей рекомендуется проводить регулярные профилактические промывки колонки; не ждите появления фантомных пиков, прежде чем принимать меры, так как профилактика всегда лучше лечения.
4. Проверка системы ввода пробы | Пристальное наблюдение за «носителями» образца
Иглы для инъекций, держатель иглы, дозирующее кольцо и шестиходовой клапан образуют путь, по которому образцы поступают в прибор; они также являются зонами, наиболее подверженными остаточному загрязнению. После анализа образцов с высокой концентрацией компоненты остаются в зазорах; они вымываются при следующей инъекции, превращаясь в фантомные пики.
Процедура: Тщательно промойте иглу для инъекций, держатель иглы, дозирующее кольцо и шестиходовой клапан метанолом или изопропанолом, одновременно заменив раствор для промывки иглы на свежую порцию.
Практический совет: после анализа высококонцентрированных проб увеличьте частоту и объём промывки иглы, чтобы тщательно очистить путь ввода и устранить фантомные помехи, вызванные остатками от предыдущего ввода.
5. Поэтапная локализация неисправностей трубопровода | Сужение области поиска
Если фантомный пик сохраняется после предыдущих четырёх шагов, примените метод поэтапной локализации трубопровода.
Процедура: снимите хроматографическую колонку и с помощью двухстороннего соединителя обойдите конкретный участок трубопровода, изменив путь потока, чтобы определить, загрязнён ли этот участок.
Примечание: Не перерезайте трубку напрямую, так как базовые данные, полученные при неполном пути потока, недостоверны. Если после обхода определённого участка призрачный пик исчезает, это указывает на то, что загрязнение скрыто именно в этом участке трубки. Систематически сужая обширную полную ВЭЖХ-систему до конкретного участка трубки, даже самое стойкое загрязнение не сможет найти себе укрытия.
6. Проверка детектора | Последний подозреваемый
После того как все предыдущие компоненты были исключены, мы должны обратить внимание на последний компонент — детектор.
Эта процедура состоит из двух этапов:
• Очистите детекторную ячейку, чтобы удалить остаточные загрязнения изнутри ячейки;
• Проверьте время работы дейтериевой лампы и энергию источника света. Старение дейтериевой лампы и спад энергии могут напрямую вызывать колебания и дрейф базовой линии; при отображении на хроматограмме это проявляется как помеховые сигналы, напоминающие фантомные пики. Подтвердив, что дейтериевая лампа выработала свой ресурс, и своевременно заменив её, вы устраните фантомные помехи.
Золотое правило устранения неполадок: меняйте только одну переменную за раз! Есть ещё один ключевой принцип шестиэтапного процесса устранения неполадок, который нельзя упускать из виду: во время любой отдельной операции меняйте только одну переменную.
Будь то смена подвижной фазы или промывка колонки, каждый шаг должен проверяться по отдельности. Ни при каких обстоятельствах не следует одновременно менять подвижную фазу, промывать колонку и очищать иглу инжектора. Даже если фантомные пики исчезнут, вы не будете знать, какой именно шаг решил проблему. Если неисправность повторится, вам придётся вслепую повторять весь набор операций. Управляя одной переменной, вы сможете точно определить корневую причину неисправности, и каждый сеанс устранения неполадок будет вносить вклад в ваш практический опыт.
Contact
Leave your information and we will contact you.
телефон