20 Неписаных Правил для Приборов Жидкостной Хроматографии

**Автор: Оригинал от г-жи Сяоюэ Лю | HAMAG

Приборы для жидкостной хроматографии могут выглядеть надежными, но на самом деле они довольно хрупкие. Многие неисправности возникают не из-за «износа», а из-за «неправильного использования» — определенные привычки в работе, которые мы считаем само собой разумеющимися, незаметно сокращают срок службы прибора. Каждое из следующих 20 «неписаных правил» представляет собой урок, усвоенный с трудом теми, кто был до нас.

1. Подвижная фаза должна быть отфильтрована — используйте мембрану с размером пор 0,22 мкм или 0,45 мкм; несоблюдение этого требования равносильно износу насоса.

2. Измерьте pH в водной фазе — отрегулируйте его перед добавлением органической фазы, так как органическая фаза будет мешать показаниям электрода.

3. Используйте буферные соли в правильном диапазоне pH — каждая соль эффективна только в определенном диапазоне pH; неправильное использование — пустая трата времени.

4. Только ультразвуковой дегазации недостаточно — используйте ее в сочетании с вакуумным дегазатором, иначе пузырьки заставят вас усомниться в своем здравомыслии.

5. Не начинайте градиентное элюирование с 0% органической фазы — риск выпадения солей и образования пузырьков крайне высок; особое внимание уделите фосфатам. (Применимо только к системам, содержащим соли.)

6. Никогда не допускайте полного высыхания подвижной фазы — работа насоса всухую приводит к прямому износу плунжера и уплотнительных колец, а ремонт насоса стоит дорого.

7. Сразу после использования солевой подвижной фазы промойте систему — сначала чистой водой, затем метанолом; кристаллы соли изнашивают насос, как абразивная губка.

8. Поддерживайте мягкую скорость потока и выполняйте аккуратные инъекции — резкие изменения воздействуют на слой колонки, вызывая необратимое повреждение набивки.

9. Перед использованием новой колонки проверьте, смешиваются ли раствор для хранения и подвижная фаза — если нет, немедленно откажитесь от колонки.

10. Колонку необходимо промывать переходной фазой до и после использования соли — промывайте 10% метанолом/водой в объеме 10 объемов колонки; пропуск этого шага испортит колонку.

11. Не промывайте колонку в обратном направлении без разбора — если это явно не разрешено в руководстве, это приведет к резкому снижению эффективности колонки.

12. Обязательно устанавливайте защитную колонку — небольшие вложения, которые экономят много средств в долгосрочной перспективе; заменяйте её при загрязнении.

13. Колонки нельзя допускать до высыхания — для неиспользуемых колонок плотно закручивайте заглушки на оба конца; если они высохнут, они засорятся.

14. Образцы должны быть отфильтрованы — фильтруйте все образцы, содержащие частицы; используйте гидрофильную мембрану из ПТФЭ с размером пор 0,22 мкм для полисахаридов и белков.

15. Растворитель образца должен быть совместим с подвижной фазой — чрезмерная элюирующая способность вызовет сольвентные эффекты и приведет к плохой форме пика.

16. Всегда прогоняйте холостую пробу перед градиентным элюированием — в противном случае пики примесей будут маскироваться под пики образца, что сделает все данные бесполезными.

17. Оценивайте влияние примесей и в методах количественного анализа — не принимайте ничего как должное; это вернётся к вам во время испытаний стабильности.

18. При переносе методов учитывайте различия в мёртвом объёме приборов — один и тот же метод может давать совершенно разные результаты на разных приборах.

19. Используйте свои органы чувств для ежедневной «проверки» прибора — прислушивайтесь к необычным звукам, следите за пузырьками и проверяйте на утечки; раннее обнаружение означает быстрое решение.

20. Используйте только реагенты хроматографической чистоты — примеси в реагентах аналитической чистоты доведут вас до отчаяния, когда вы будете гоняться за призрачными пиками.