Nhiều yếu tố ảnh hưởng đến tuổi thọ cột sắc ký và các giải pháp của chúng

**Thông tin thu thập từ Internet

Tuổi thọ của cột sắc ký là một vấn đề được quan tâm đáng kể, vì nó liên quan trực tiếp đến chi phí. Những yếu tố nào ảnh hưởng đến thời gian sử dụng của cột? Có phương pháp nào để kéo dài tuổi thọ này không?

Điều kiện sắc ký được coi là khắc nghiệt khi:

① Độ pH của pha động quá cực đoan;

② Nồng độ muối đệm trong pha di động là quá cao;

③ Áp suất cột là quá cao;

④ Nhiệt độ cột là quá cao.

1. Các cột dựa trên silica tiêu chuẩn thường chịu đựng được các giá trị pH từ 2 đến 6. Dưới pH 2, pha liên kết có thể thủy phân và tách ra; trên pH 7, đóng gói silica có thể hòa tan và rò rỉ.

2. Nồng độ muối đệm quá cao trong pha di động:

① Tạp chất cơ học trong muối đệm cũng có thể tăng cao; cần lọc màng muối đệm.

② Ở nồng độ muối đệm cao, tỷ lệ pha hữu cơ quá mức trong gradient có thể gây kết tủa muối, làm tắc nghẽn bộ trộn, kim tiêm, cột và ống dẫn.

3. Áp suất cột cao do độ nhớt pha động cao:

Dung môi có độ nhớt cao: ví dụ, isopropanol, ethanol, dioxane, hỗn hợp methanol-nước

4. Các nhà sản xuất thường khuyến nghị nhiệt độ cột dưới 50°C, vì nhiệt độ quá cao có thể làm giảm tuổi thọ của cột.

1. Các cột lai hữu cơ, như đã đề cập trước đó, thể hiện khả năng dung sai vượt trội đối với sự biến động của pH môi trường và nhiệt độ.

2. Cấu trúc vi xốp bên trong ma trận silica, tương tự như các khe nứt răng, dễ dàng gây ra hiện tượng giữ mẫu hoặc hấp phụ chết.

3. Các cột có kích thước hạt nhỏ hơn dễ bị tăng áp suất cột

Chúng ta phải hiểu nguồn gốc của mẫu—liệu nó là chiết xuất từ sản phẩm tự nhiên, mẫu sinh học, sản phẩm lên men, hay hợp chất tổng hợp. Đối với các chiết xuất từ sản phẩm tự nhiên, công việc chuẩn bị của chúng ta liên quan đến việc làm giàu hợp chất mục tiêu dựa trên các thuộc tính của nó trong khi loại bỏ các tạp chất như sắc tố có thể làm bẩn cột. Đối với các mẫu sinh học—có thể xuất phát từ mô, máu, v.v.

chúng ta phải loại bỏ các thành phần gây ô nhiễm cột như phospholipid và protein, đồng thời làm giàu các thành phần mục tiêu có số lượng ít. Đối với các sản phẩm lên men, các chất dinh dưỡng như đường trong dịch lên men và các thành phần từ tế bào vi sinh vật bị vỡ phải được loại bỏ, trong khi các thành phần mục tiêu có nồng độ thấp được làm giàu. Đối với các sản phẩm tổng hợp, chúng ta phải xác định các thành phần còn sót lại, các sản phẩm phụ và nguyên liệu thô dư thừa trong dung dịch phản ứng, loại bỏ một cách thích hợp các thành phần gây ô nhiễm cột.

Nguồn ô nhiễm cột: ① Xuất phát từ mẫu; ② Xuất phát từ pha di động.